Evaluación del medio EMJH convencional y modificado sobre la cinética de crecimiento y la expresión de genes de patogenicidad en cepas de Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae

Abstract

La leptospirosis es una enfermedad zoonótica producida por espiroquetas patógenas del género Leptospira spp. son de crecimiento lento debido a que son exigentes nutricionalmente. En este estudio se determinó el efecto del medio de cultivo EMJH convencional y modificado sobre la cinética de crecimiento y la expresión de genes asociados con patogenicidad en dos cepas de Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae. La metodología comprendió la realización de pruebas fisicoquímicas y microbiológicas de los suplementos convencional y modificado. Se estimó el crecimiento microbiano en el medio de cultivo EMJH bajo condiciones estáticas y de agitación por espectrofotometría y la uniformidad celular con microscopio de campo oscuro. El estudio molecular se realizó identificando los genes lipL32 y ompL1 en tres puntos de la cinética de crecimiento (fase de adaptación, fase exponencial y fase de declive) por PCR convencional y la expresión del gen lipL32 por PCR en Tiempo Real. Los resultados fisicoquímicos de los suplementos mostraron diferencias significativas (p<0.05). La evaluación microbiológica para mesófilos, mohos y levaduras, coliformes y S. aureus, fue de U.F.C/mL<10 y ausencia de Salmonella spp y Listeria monocytogenes. Los resultados en la cinética de crecimiento y el estudio molecular en la cepa aislada y control ATCC (23581) de Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae en el medio modificado y convencional bajo la condición estática y agitado, indicaron que se obtuvo un adecuado rendimiento celular, se verificó la presencia de los genes lipL32 y ompL1 y la expresión del gen lipL32. Este trabajo se presenta como una contribución en el desarrollo de nuevos medios de cultivo, bajo en proteínas, que permitan el crecimiento y mantenimiento de las cepas de Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae en EMJH modificado, sin afectar la expresión de genes asociados con patogenicidad, donde se utilizó como suplemento un subproducto industrial de desecho (sujeto a patente), beneficiando a la comunidad científica y al sector industrial productor de vacunas. Nota: Para consultar la carta de autorización de publicación de este documento por favor copie y pegue el siguiente enlace en su navegador de internet: http://hdl.handle.net/10818/8781