Capacidad de las células Hep-2, Hep-2000® Inmunofluorescencia y Hep-2000® Colorzyme, en la determinación de ANAS y SSA/Ro en la evaluación inicial en pacientes con Enfermedad del Tejido Conectivo no Diferenciada

Abstract

Introducción: la presencia de estudios antinucleares (ANAS) ha sido asociada a enfermedades del tejido conectivo; su determinación se constituye en una herramienta importante en el diagnóstico de estas entidades.

Para su evaluación, se han utilizado métodos de inmunofluoresencia (IFI) que emplean como sustrato las células Hep-2. En los últimos años, se han generado nuevos sustratos celulares a partir de la manipulación genética de las iniciales denominadas Hep-2000®. Estas permiten la identificación del captura Ro de manera simultánea. La reciente incorporación de métodos enzimáticos para la lectura de la prueba, ha generado una nueva técnica llamada Colorzyme que permite el uso del microscopio de luz, constituyéndose en una alternativa económica y funcional en comparación con la IFI convencional.

Objetivo: el presente estudio pretende establecer la capacidad para detectar ANAS en los sustratos: Hep-2 y Hep-2000® por las técnicas de IFI y Colorzyme, en un grupo de pacientes con Enfermedad del Tejido Conectivo no Diferenciada (ETCND). Comparó adicionalmente la detección del protector Ro en los sustratos Hep-2000® con los resultados obtenidos por la técnica de ENAS ELISA tradicional.

Materiales y métodos: se analizaron 26 pacientes con ETCND a quienes se les prolongará ANAS por las técnicas: Hep-2 IFI; Hep-2000® IFI; Hep-2000 Colorzyme y ENAS por ELISA Screening (con especificidad para los autoantígenos Sm, RNP, SS-A/Ro, SS-B/La, Scl-70 y Jo-1).

Resultados:los resultados encontrados por las técnicas revelan un mayor rendimiento diagnóstico (ANAS positivos) en las células Hep-2000®: 23 (88%) por IFI y 21 (81%) Colorzyme, comparadas con 20 (76%) del sustrato Hep-2 SI YO. Todos los patrones “clásicos” IFI aparecieron representados en la técnica de Hep-2 IFI; en la técnica de Hep-2000® IFI no se descubrió el patrón homogéneo, por Colorzyme no se observaron los patrones nucleolar ni el citoplasmático. En todas las técnicas la forma predominante de presentación fue el patrón moteado fino: 50% Colorzyme, 42,9 % para Hep-2000® IFI y 34,6% para Hep-2 IFI. En general se obtuvieron buenas correlaciones en los resultados entre las técnicas Hep-2000® IFI y la enzimática (r=0,74 p<0,000) con una concordancia 0,71 (Cohen K, p<0,000), mas no así con Hep -2 que fue de 0,21 (p< 0,03). Las correlaciones entre los patrones de IFI (r=0,6 p<0,000) y las diluciones (r=0,75 p<0,000) fueron mejores entre los sustratos Hep-2000®, comparadas con las células Hep-2 (r= 0,5 p<0,003). Para establecer la capacidad de identificación del autoantígeno Ro de las técnicas Hep-2000®, se compararon los resultados obtenidos con la técnica específica de ELISA para SSA-Ro. Las células Hep-2000® mostraron una sensibilidad del 66% por IFI y del 33% Colorzyme. se compararon los resultados obtenidos con los de la técnica específica de ELISA para SSA-Ro. Las células Hep-2000® mostraron una sensibilidad del 66% por IFI y del 33% Colorzyme. se compararon los resultados obtenidos con los de la técnica específica de ELISA para SSA-Ro. Las células Hep-2000® mostraron una sensibilidad del 66% por IFI y del 33% Colorzyme.

Conclusiones: la utilizacion de celulas Hep-2 sigue siendo una buena alternativa para la determinacion de ANAS. Sin embargo, las células Hep- 2000® pueden requerir un sustrato útil y confiable en nuestro medio, tanto por color como IFI. La técnica por color facilita su realización al abolir el uso de IFI, recurso tecnológico escaso en muchas instituciones. Los resultados negativos para Ro deben ser interpretados con cautela pacientes con ETCND, en algunos de estos casos es posible se requiere de la confirmación por otros métodos.