%0 Generic
%A Jaramillo, Lorenza
%A Briceño, Ignacio
%A Durán, Camilo
%8 2012
%U http://hdl.handle.net/10818/57858
%X In order to obtain a tooth-like structure, embryonic oral ectoderm
cells (EOE) and bone marrow-derived stem cells (BMSC) were
stratified within a synthetic hydrogel matrix (PEGDA) and
implanted in the ileal mesentery of adult male Lewis rats. Wholemount in situ hybridization was used to evaluate the expression
of Pitx2, Shh and Wnt10a signals indicative of tooth initiation. In
rats, expression of the three markers was present in the oral ectoderm starting at embryonic stage E12.5, which was therefore
selected for cell harvesting. Embryos were obtained by controlled
service of young female Lewis rats in which estrus was detected
by impedance reading. At E12.5, pregnant rats were humanely
euthanized and embryos were collected. The mandibular segment
of the first branchial arch was dissected and the mesenchyme separated from the ectoderm by enzymatic digestion with pancreatin
trypsin solution. BMSCs were collected by flushing the marrow
of tibiae and femurs of adult Lewis rats with α-MEM and cultured in α-MEM in 25 cm2 flasks. Second passage BMSC’s were
recombined with competent oral ectoderm (E12.5-E13) stratifying them within a 3D PEGDA scaffold polymerized by exposure
to UV (365nm) inside a pyramidal polypropylene mold. Constructs were incubated from 24 to 48 hrs in α-MEM and then
implanted for four to six weeks in the mesentery of adult male (3-
6 month old) Lewis rats. 76 constructs were implanted (37 experimental, 27 negative controls and 12 positive controls). Upon
maturation, constructs were harvested, fixed in buffered formalin, processed and stained with hematoxylin eosin (HE). Histological evaluation of the experimental and negative constructs
showed that BMSCs underwent an apoptotic process due to lack
of matrix interactions, known as anoikis, and were thus incapable
of interacting with the competent ectoderm. In contrast, embryonic oral ectoderm was able to proliferate during the mesenteric
implantation. In conclusion, PEGDA scaffolds are incompatible
with BMSCs, therefore it is essential to continue the search for an
ideal scaffold that allows proper tissue interactions
%X Para lograr la formación de una estructura similar a un diente se estratificaron células de ectodermo oral embrionario
(EOE) con células troncales de medula ósea (BMSC) dentro
de una matriz de diacrilato de polietilenglicol (PEGDA) que
se implantó en el mesenterio ileal de machos adultos de ratas
Lewis. Mediante hibridización in situ de bloque completo se
evaluó la expresión de tres genes iniciadores putativos de la
formación dental (Pitx2, Shh y Wnt10a), estableciendo que en
ratas las señales iniciadoras de dentogénesis aparecen entre
E12.5 y E13. El tejido ectodérmico embrionario se obtuvo
haciendo cruces controlados de hembras a las que se les detectó el estro mediante impedanciometría. En E12.5 las hembras
se sacrificaron y se extrajeron los embriones. Se disecó la porción mandibular del primer arco branquial y el ectodermo se
separó del mesénquima mediante disociación enzimática con
una solución de pancreatina tripsina. Las BMSC se extrajeron de los huesos largos de las extremidades inferiores de
ratas mediante lavado con α-MEM y se cultivaron en cajas de
25cm2 hasta un segundo pasaje. Las BMSC fueron recombinadas con ectodermo embrionario competente (E12.5 - E13)
estratificándolas en un soporte tridimensional de PEGDA,
polimerizado con luz ultravioleta (365nm) dentro de un molde
piramidal de polipropileno (PP). Los constructos se cultivaron entre 48 y 72 horas en α-MEM y posteriormente fueron
implantados en el mesenterio ileal de machos adultos (3 a 6
meses de edad) por un período de cuatro a seis semanas. Se
implantaron 76 constructos (37 experimentales, 27 controles
negativos y 12 controles positivos). En la fecha determinada
los animales se sacrificaron mediante asfixia con una mezcla
de CO2 y aire recuperando los constructos que se fijaron en
formalina tamponada para luego procesarlos y teñirlos con
hematoxilina eosina (HE). La evaluación histológica de los
constructos experimentales, positivos y negativos mostró que
las BMSC incluidas en el hidrogel sufrieron un proceso de
apoptosis conocido como anoikis que impidió su interacción
con las células ectodérmicas. En contraste el EOE proliferó
durante el período de implantación. A futuro se debe buscar
la matriz portadora ideal que permita el confinamiento de los
dos grupos celulares y que brinde el soporte estructural necesario para la proliferación de las BMSC facilitando su interacción con las células inductoras de origen ectodérmico.
%I Archives of Disease in Childhood-Fetal and Neonatal Edition,
%K Parto de rodillas
%K América
%K 2000
%T Kneeling delivery in America 2000 years ago
%T Parto arrodillado en América hace 2000 años
%R 10.1136/adc.2007.133678
%~ Intellectum